Дата публикации: 2010-12

Дата публикации в реестре: 2020-03-03T17:29:40Z

Аннотация:

Са²⁺-регулируемые фотопротеины, генетически слитые с биоспецифическими полипептидами, широко используются как репортеры для внутриклеточного мониторинга Са²⁺, а также в анализе in vitro. Ранее было показано, что модификации фотопротеина акворина по С-концу приводят к потере его биолюминесцентной активности, поэтому химерные белки получали только присоединением полипептида к его N-концу. В представленной работе исследуется возможность получения слитых белков по С-концу другого фотопротеина - обелина. При этом вначале обелин (OL) генетически удлинили на одну аминокислоту - тирозин (Y), а затем получили обелин, слитый через длинный гибкий линкер (31 аминокислота) с зеленым флуоресцентным белком медузы Clytia gregaria (cgreGFP). Оба белка (OL-Y и OL-cgreGFP) были выделены, их основные свойства изучены. Показано, что OL-Y образует устойчивый фотопротеиновый комплекс, биолюминесцентная активность которого составляет 75 % активности обелина дикого типа (WT-OL). Активность OL-cgreGFP составляет 46 % от активности WT-OL. При запуске биолюминесцентной реакции ионами кальция наблюдается эффективный резонансный перенос энергии, в котором обелиновая часть химерного белка является донором, а cgreGFP - акцептором энергии. Таким образом установлено, что репортерные молекулы на основе Ca²⁺-регулируемого фотопротеина обелина могут быть получены генетическим слиянием с биоспецифическими полипептидами по его С-концу.

Тип: Journal Article