Воробейник лекарственный (Lithospermum officinale L.) — ценное лекарственное растение, которое используется в народной медицине с давних времен. В данной работе разработана методика количественного определения флавоноидов в листьях воробейника лекарственного методом дифференциальной спектрофотометрии по реакции флавоноидов с хлоридом алюминия. Определены оптимальные продолжительность реакции и отношение объема водно-спиртового экстракта листьев воробейника лекарственного к объему 2%-го водно-спиртового раствора хлорида алюминия. В качестве образца сравнения для расчета содержания флавоноидов выбран рутин. Разработанная методика оценена по валидационным характеристикам: специфичность, линейность, прецизионность, правильность и является пригодной для использования в аналитических целях. Установлено, что в листьях воробейника лекарственного различного года культивирования содержание флавоноидов в пересчете на рутин составляет более 2% от массы абсолютно сухого сырья.